大腸桿菌表達(dá)純化服務(wù)
大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、遺傳背景清楚、目的基因表達(dá)水平高、培養(yǎng)周期短等優(yōu)勢(shì)，被認(rèn)為最廣泛最經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的經(jīng)典表達(dá)系統(tǒng)，近幾十年，大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)也不斷發(fā)展和完善，被科研及工業(yè)用戶大量用于各種重組蛋白表達(dá)。該系統(tǒng)主要用于抗原制備、配體制備以及細(xì)胞因子和細(xì)菌（金黃色葡萄球菌、大腸桿菌等）蛋白的表達(dá)。
華美生物在大腸桿菌蛋白表達(dá)和純化方面擁有豐富的經(jīng)驗(yàn)，通過不斷的優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件能解決蛋白表達(dá)純化過程中的各種疑難問題。
擁有豐富的表達(dá)純化經(jīng)驗(yàn)和專業(yè)技術(shù)，通過不斷的優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件能解決蛋白表達(dá)純化過程中的各種疑難問題。自2007年起的18年里，我們成功開發(fā)了7000多種在大腸桿菌中表達(dá)的重組蛋白，其中包含數(shù)百種高純度的活性蛋白。
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系統(tǒng)優(yōu)勢(shì)
- 遺傳背景清楚；
- 蛋白表達(dá)周期短，易放大；
- 生長(zhǎng)速度快，表達(dá)水平高；
- 可選擇載體和融合標(biāo)簽多；
- 可調(diào)控不同參數(shù)得到最適表達(dá)。
服務(wù)優(yōu)勢(shì)
- 超高性價(jià)比，低至3500元起；
- 表達(dá)成功率高達(dá)98%；
- 上清率>85%；
- 貨期短，25個(gè)工作日內(nèi)即可交付；
- 產(chǎn)量高達(dá)200mg/L。
我們承諾
注：該無(wú)風(fēng)險(xiǎn)定制蛋白服務(wù)僅適用于800個(gè)氨基酸以內(nèi)的蛋白質(zhì)。如果您需要表達(dá)超過800個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)，我們將按步驟收費(fèi)。
服務(wù)內(nèi)容
| 步驟 | 服務(wù)項(xiàng)目 | 服務(wù)說(shuō)明 | 華美生物特色 | 周期 |
|---|---|---|---|---|
| 1 | 質(zhì)粒構(gòu)建
 |
密碼子優(yōu)化全基因合成 | 多個(gè)載體優(yōu)化 為了得到最高的表達(dá)量蛋白,多個(gè)載體同時(shí)優(yōu)化，縮短了貨期，讓客戶有更多的選擇。 |
5-8工作日 |
| PCR擴(kuò)增產(chǎn)物酶切連接到PCold-SUMO,pGEX-4T-1,pET22b-JT等多個(gè)融合載體上 | ||||
| 轉(zhuǎn)化TOP10宿主 | ||||
| 獲得測(cè)序正確的重組質(zhì)粒 | ||||
| 2 | 轉(zhuǎn)化及菌株篩選
 |
構(gòu)建重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到BL21(DE3)、Rosetta-gami B(DE3)pLysS、C41等宿主, 37℃過夜培養(yǎng) | 多條件優(yōu)化、多宿主選擇 小試中對(duì)其溫度、IPTG量進(jìn)行優(yōu)化，優(yōu)化出合適的培養(yǎng)條件，同時(shí)多個(gè)宿主進(jìn)行轉(zhuǎn)化選擇表達(dá)量最高的宿主菌。 |
2-3工作日 |
| 挑取單菌落進(jìn)行小量誘導(dǎo)表達(dá)，SDS-PAGE電泳檢測(cè),保種 | ||||
| 進(jìn)行表達(dá)條件優(yōu)化，確定最佳表達(dá)條件 | ||||
| 3 | 目標(biāo)蛋白表達(dá)及純化
 |
根據(jù)小量結(jié)果提供1-10L放大體系表達(dá) | 多條件優(yōu)化上清表達(dá) 表達(dá)載體和菌株優(yōu)化，超低溫條件誘導(dǎo)，最大程度保持蛋白可溶性達(dá)72%以上 |
5-9工作日 |
| 多種表達(dá)策略和純化方式同時(shí)進(jìn)行 | ||||
| 4 | 其他（可選）
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通過酶切去除標(biāo)簽 | 靈活的附加服務(wù)（可選） 提供多種附加服務(wù)，客戶可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求靈活選擇 |
3個(gè)工作日 |
| 所有蛋白都可以提供無(wú)菌操作和內(nèi)毒素去除服務(wù) | 3個(gè)工作日 | |||
| 5 | 質(zhì)控
 |
進(jìn)行純度、濃度等檢查，并提供QC報(bào)告 | 詳細(xì)的質(zhì)控報(bào)告 為每個(gè)項(xiàng)目提供產(chǎn)品說(shuō)明書及完善的質(zhì)控報(bào)告 |
3-5工作日 |
| 總時(shí)間 | 15-25工作日 | |||
案例展示
案例1：
特色：融合表達(dá)蛋白采用PreScission酶進(jìn)行酶切，通過GST親和層析柱上酶切一步純化得到無(wú)標(biāo)簽蛋白。
蛋白酶切示意圖
泳道1：細(xì)胞裂解液（箭頭所指為融合蛋白）
泳道2：穿透液
泳道3：酶切穿透（箭頭所指為目的蛋白）
泳道4：PBS除雜
泳道5：GSH洗脫（箭頭所指為GST標(biāo)簽蛋白）
泳道6：目的蛋白濃縮
案例2：
特色：此蛋白通過鎳柱親和層析一步純化得到目的蛋白，純度可以達(dá)到90%，產(chǎn)量可以達(dá)到20mg/L。
泳道1：細(xì)胞裂解液
泳道2：穿透液
泳道3：30 mM 咪唑洗脫
泳道4：60 mM 咪唑洗脫
泳道5：200 mM 咪唑洗脫
泳道6：500 mM 咪唑洗脫
案例3：
特色：同個(gè)項(xiàng)目可以有多個(gè)融合標(biāo)簽選擇。
泳道1：細(xì)胞裂解液
泳道2：穿透
泳道3：GSH洗脫
泳道1：60 mM 咪唑洗脫濃縮
泳道2：200 mM 咪唑洗脫濃縮
泳道3：500 mM 咪唑洗脫濃縮
案例4：
特色：蛋白活性。
The Binding Activity of aqpZ with ytfE
Activity: Measured by its binding ability in a functional ELISA. Immobilized aqpZ at 5 μg/ml can bind human ytfE, the EC50 of human ytfE protein is 197.90-259.70 μg/ml.
聯(lián)系信息
電話：027-87002556
Q Q：1031906505 
地址：武漢市東湖新技術(shù)開發(fā)區(qū)高新大道818號(hào)高科醫(yī)療器械園B11號(hào)2樓
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武漢華美生物工程有限公司成立于2007年12月，是一家集科研、生產(chǎn)、銷售為一體的生物高新技術(shù)企業(yè)。并形成了以CUSABIO為品牌的ELISA試劑盒、蛋白、抗體等多種優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品，遠(yuǎn)銷歐美日德等九十多個(gè)國(guó)家。
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